pulldown实验原理

GST pull-down：是利用重组技术将探针蛋白与GST谷胱苷肽巯基转移酶融合，融合蛋白通过GST与固相化在球珠上的GSH谷胱甘肽结合。从而分离出能与融合蛋白相互作用的蛋白的技术。

扩展资料

1、构建含His或GST标签的诱饵蛋白原核表达载体；

2、原核表达诱饵蛋白（我们采用自诱导培养基培养细菌，能有效降低包涵体的'形成）；

3、细菌裂解液过柱，带标签的诱饵蛋白被固相化亲和配基捕获，产生“次级亲和支持物”；

4、待测样品裂解液过柱孵育，与诱饵蛋白互作的蛋白被“次级亲和支持物”吸附；

5、清洗，离心，去除未结合的杂蛋白；

6、洗脱，得到诱饵蛋白及其互作蛋白的复合物；

7、如要验证某蛋白X与诱饵蛋白互作，则将6.所得的蛋白复合物与X蛋白的抗体孵育，做Western blot验证即可；

8、如要寻找诱饵蛋白可能的互作蛋白，则需将6.所得的蛋白复合物做LC-MS/MS鉴定。