五弦琵琶使用调音器定音，演奏不同的乐曲，定音也就不同，如琵琶曲《彝族舞曲》，五弦琵琶定音为3、6、2、3、6，由于增加了低音，音乐的层次感加强，乐曲第二段的22小节到29小节和声织体更丰富了。琵琶曲《梅花三弄》，五弦琵琶定音为1、5、1、2、5，增加第五弦后，乐曲的第一小节到第十小节的低音更浓厚。
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